火狐电竞：液相使用常见问题15问答疑！

　　1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?

　　①柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器)

　　⑧样品中有强保留的物质(高K值)以头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线

　　②使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用在线脱气或氦气脱气

　　③用甲醇或其他强极性溶剂中洗流通池。如有需要,可以用1N的的酸(不要用盐酸）

　　⑥用中等强度的溶剂进行冲洗。更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂、缓冲盐更应注意平衡柱

　　⑧改变分析条件。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子

　　③常规检测：测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中

　　a.等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min

　　b.梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min

　　注意：过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐

　　c.缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中

　　②检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封

　　⑤断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。采用精密级稳压电源

　　①检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液

　　7.氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？

　　答：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％

　　⑩检测器与记录仪超出校正曲线，解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？

　　柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：

　　①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查

　　③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查。只用于使用过的柱子

　　④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题

　　②在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散③数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点

　　②液路阻力比较大，吸液时出现了真空气泡③系统开始工作时未能将流路中的空气排除干净

　　②氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多

　　④超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好

　　答：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％

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